برای تجربه بهتر لطفا مرورگر خود را به گوگل کروم، فایرفاکس، اپرا و یا اینترنت اکسپلورر تغییر دهید
تفاوت FPLC و HPLC

تفاوت FPLC و HPLC

کروماتوگرافی مایع سریع پروتئین (FLPC) و کروماتوگرافی مایع با کارایی بالا (HPLC) هر دو برای جدا کردن مولکول های بیولوژیکی طراحی شده اند (هر چند کاربرد HPLC در دنیای شیمی بسیار گسترش یافته و فراتر رفته است). این جایی است که شباهت به طور عمده به پایان می رسد. درست است که هر دو آنها از یک تکنولوژی با ریشه ای مشترک متولد شده  اند با این حال، نوآوری ها و کاربردهای گسترده، منجر به تنوع عملکردی بین این دو شده است.

مولکول های هدف – کروماتوگرافی FPLC در آنالیز بیومولکول های پروتئینی به علت عدم توانایی این آنالیت ها برای مقاومت در برابر دمای بالا، فشار بالا یا حلال های معمولی که در HPLC استفاده می شود بسیار مورد نیاز است. این امر نیاز به توسعه سخت افزار و تکنیک هایی دارد که طیف وسیعی از بیومولکول ها را با هر نوع رفتار و شرایط  شامل می شود می دهد. HPLC، برعکس، در جداسازی مولکول ها یا ترکیباتی که محلول هستند و در برابر فشار و حرارت مقاوم هستند، به کار می رود. تکنیک های HPLC کم تر می توانند ساختار پیچیده را حفظ کننند و بیشتر محلول بودن را حفظ می کنند.

FPLC برای خالص زیست مولکول های بزرگ چند کیلوالتون (kDa) در اندازه گیری از جمله پروتئین، نوکلئوتیدها و پپتید های بزرگ استفاده می شود، با این هدف که محصولی خالص و اصل را به دست آورد. چالش اساسی در FPLC پاک کردن مولکول های مواد پیچیده منبع (مانند لسیت های سلولی) است که اغلب با DNA، RNA، غشاهای سلولی و دیگر مواد نامطلوب همراه هستند. به همین دلیل، لوپ های نمونه بسیار بزرگتر از آنهایی است که برای HPLC مورد استفاده قرار می گیرند، اغلب برای نمونه موثر رقیق می شوند. در نتیجه، جریان های بالاتر می تواند در FPLC مورد استفاده قرار گیرند.

از سوی دیگر، HPLC عمدتا برای شناسایی، مشخص کردن و اندازه گیری ترکیبات کوچک (بیولوژیکی و یا غیره) از اندازه چند اتم تا حدود ۳۰۰۰ Da استفاده می شود. این ترکیبات الزامات پیچیده ای برای حفظ ساختار و عملکرد بومی در بیومولکول های بزرگتر ندارند. بنابراین آنها اغلب در محلول آلی به حالت تعلیق در می آیند و تحت فشار بالا قرار می گیرند و گاهی در طول جداسازی کروماتوگرافی حرارت داده می شوند. علاوه بر این، به طور معمول کمتر نگرانی آلودگی نمونه به ناهمگونی پیچیده مانند لسیت سلولی معمولی وجود دارد، و در نتیجه به طور معمول از لوپ های نمونه کوچکتری استفاده می شود.

نحوه جداسازی – یکی دیگر از تفاوت های عمده  نحوه جداسازی است. برای HPLC دانه های سیلیکا با اندازه های بسیار کوچک و با مقاومت بالا به فشار، در ماتریس ستون استفاده می شود. FPLC، برعکس، به ماده آگارز یا پلیمربا ذرات و اندازه منافذ بزرگ تر نیاز دارد. رزین های FPLC مقاوم به فشار نیست و می تواند یکپارچگی خود را در شرایط دستگاه HPLC از دست بدهد. آنها همچنین به حباب های هوا حساس هستند، مشکلاتی که باید کنترل شوند تا مانع جدا شدن بستر و عملکرد ستون شود.

ستون ها – تفاوت نه تنها در رزین ها که در نوع ستون ها هم هست. اغلب ، ستون های HPLC و لوپ های نمونه از فولاد ضد زنگ مقاوم در برابر فشار ساخته شده اند تا فشار بالای این روش را کنترل کنند. البته فشارهای نسبتا کم در FPLC به معنی استفاده از ستون های شیشه ای می باشد. اینها با بیومولکول های مورد علاقه بیشتر سازگار هستند، با این امتیاز که می توان از سطح ستون برای حباب ها و یکپارچگی در طول اجرا استفاده کرد.

روش ها – روش های جداسازی بین پلتفرم ها هم شبیه و هم متمایز هستند. HPLC آنالیتیکال می تواند شامل کروماتوگرافی فاز برگشت پذیر با فاز ثابت هیدروفوب و فاز متحرک قطبی باشد. روش های جایگزین عبارتند از: کروماتوگرافی پارتیشن، کروماتوگرافی فاز حالت فیزیکی، کروماتوگرافی جابجایی، حذف اندازه، تبادل یونی. FPLC شامل یک سری از روش های بسیار گسترده ای است که شامل: مبادله یون، پیوستگی، انحراف اندازه، فیلتر کردن ژل و روش ها است که همه مربوط به ماهیت پیچیده پس زمینه و ماهیت منحصر به فرد مولکول هدف است.

تفاوت های دیگر – البته تفاوت های بسیاری نیز وجود دارد: پمپ ها، آب بندی ها، اتصالات، پورت های تزریق، نمونه گیری خودکار، کنترل کننده ها و دیگر موارد برای هر پلت فرم منحصر به فرد هستند. تفاوت ها بیشتر جایی خود را متمایز می کنند  که مقیاس از آنالیتیکال به مقیاس صنعتی یا فرآیند تغییر کند.

بازیگران و تولید کنندگان عمده در حوزه HPLC عبارتند از: واترز، اجیلنت، شیمادزو و و تعدادی از تولیدکنندگان ابزارهای آنالیتیکال دیگر. دز زمینه FPLC نام تجاری AKTA از جنرال الکتریک مشهور است که دارای تاریخچه ای به قدمت دستگاه HPLC سری ۱۱۰۰/۱۲۰۰ اجیلنت می باشد.

در نهایت، هر دو پلتفرم دارای کاربردها و مزایای زیادی هستند. این که کدام دستگاه مناسب چه کاری است به ماهیت بیوشیمیایی مولکول هدف و پس زمینه، عملکرد مورد نظر و سایر اهداف مربوط می شود.

لطفا نظر خود را بنویسید


نشانی ایمیل شما منتشر نخواهد شد. بخش‌های موردنیاز علامت‌گذاری شده‌اند *

بالا